Declaración ética

Este ensayo se realizó en total conformidad con las directrices CONSORT de 2010 de la Declaración de Helsinki de la Asociación Médica Mundial. El protocolo del estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Huai'an afiliado de la Universidad Médica de Xuzhou (número de aprobación institucional: HEYLL2020325). Fue registrado en el Registro de ensayos clínicos de China (número de registro: ChiCTR2000033420, http://www.chictr.org.cn/, Fecha de primera inscripción: 31/5/2020). Se proporcionó un consentimiento informado por escrito a cada sujeto antes de los tratamientos.

Participantes

Los pacientes fueron reclutados consecutivamente remitidos al Departamento de Reumatología, Estomatología y Oftalmología del Hospital Huai'an afiliado de la Universidad Médica de Xuzhou. A los pacientes elegibles se les diagnosticó SSp según los criterios de diagnóstico para el síndrome de Sjögren del American College of Rheumatology (ACR). Al menos dos síndromes con las siguientes tres características objetivas cumplirán los criterios: (1) pacientes con diagnóstico reciente de SSp y que no han recibido tratamientos previos; (2) anti-SSA (Ro) y/o anti-SSB (La) séricos positivos; (3) Biopsia de glándula salival labial que muestra infiltración linfocítica focal con una puntuación de foco ≥ 1 foco/4 mm²; (4) Queratoconjuntivitis seca con puntuación de tinción ocular ≥ 3.

Los criterios de exclusión para todos los pacientes fueron: (1) no usar actualmente colirios diarios para el glaucoma y no haberse sometido a cirugía de córnea ni cirugía estética de párpados en los últimos 5 años; (2) cualquiera de las siguientes condiciones: antecedentes de radioterapia en la cabeza y el cuello, infección por hepatitis C, síndrome de inmunodeficiencia adquirida, sarcoidosis, amiloidosis, enfermedad de injerto contra huésped, enfermedad relacionada con IgG4; (3) otras afecciones sistémicas que podrían afectar la progresión del SSp, como el lupus eritematoso sistémico y la artritis reumatoide; (4) antecedentes de enfermedad de sialoadenitis obstructiva crónica; (5) estado de embarazo o lactancia.

Los pacientes fueron entrevistados para proporcionar información que incluyera sus características sociodemográficas, factores de estilo de vida, cumplimiento de los medicamentos y conocimientos de autocuidado al ingresar al estudio. También se realizaron evaluaciones clínicas de la actividad de la enfermedad en la primera selección.

Aleatorización y enmascaramiento

Los pacientes fueron asignados a dos grupos mediante un programa de aleatorización generado por computadora. Al grupo de ADSC se le inyectaron ADSC, mientras que al grupo Placebo se le administró una solución salina al 0.9%. Los códigos asignados ocultos se guardaban en sobres firmados y sellados. Un investigador externo realizó la aleatorización. Los investigadores, pacientes e investigadores estaban cegados a la asignación de grupo. El cegamiento se reveló después de que se realizaron los tratamientos y se analizaron los datos.

Análisis del tamaño de la muestra

El análisis del tamaño de la muestra utilizando G Power versión 3.1.9.2 se determinó con el método de Walters considerando dos grupos de sujetos, un tamaño del efecto de 0.30 y una desviación estándar de 1.7 mediante un estudio clínico controlado aleatorio previo. Con el supuesto de distribución muestral normal, fijamos una potencia de 0.8 y un error de α = 0.05. Sumando un 10% con la compensación por abandono durante el periodo de prueba, fijamos un incremento del 20%. Se determinó la muestra final que incluía 26 sujetos en cada grupo, de modo que se obtuvo una potencia de 0.8.

La preparación de ADSC.

El fármaco en este ensayo fue una solución de ADSC. Los tejidos adiposos se obtuvieron mediante liposucción del abdomen de un donante sano. Se lavan en solución salina tamponada con fosfato (PBS) y se digieren los aspirados de grasa con colagenasa al 0.075%. Luego, estas células madre se empaquetaron en dimetilsulfóxido y lisado de plaquetas humanas y 1% de antibióticos en una condición de cultivo de 37 °C y 5% de CO.₂. Se identificaron los marcadores de superficie CD73, CD90 y CD105 mediante análisis de citometría de flujo, así como negativos para la expresión de CD14, CD11b, CD45, CD19, CD79 y HLA-DR. Antes de su uso se realizó estudio de tumorigenicidad, prueba de esterilidad y prueba negativa para Mycoplasma.

Procedimientos

La solución final del fármaco terapéutico estaba compuesta por 5 millones de células por mililitro de solución. Después de desinfectar la proyección superficial de las glándulas parótidas bilaterales con yodóforo y cubrirlas de forma estéril, se anestesió el lugar de la inyección con lidocaína al 1%. Se diluyó una dosis de 1 ml de solución de ADSC en 5 ml de solución salina al 0.9%. La solución final de células madre se inyectó en glándulas bilaterales con 0.05 ml de ADSC y una solución mixta salina (5 × 10⁴ células) por kilogramo de peso del paciente mediante una jeringa de 5 ml y una aguja de 0.45 mm bajo guía ultrasónica. La dosis y el intervalo de ADSC se inyectaron de acuerdo con nuestras investigaciones anteriores. A los pacientes del grupo placebo se les inyectó solución salina al 0.9% según la proporción mencionada anteriormente. El reflujo debe realizarse contra la sangre hacia la jeringa antes de la inyección. Se permitió a los pacientes retirarse después de descansar durante 15 min. La segunda inyección se realizó en glándulas bilaterales en la segunda y cuarta semana en condiciones similares. Todos los sujetos de este ensayo fueron reforzados con instrucciones de higiene y sin ningún tratamiento médico. En este ensayo, los pacientes fueron evaluados clínicamente en cuatro momentos de seguimiento: antes de la intervención, 1 mes, 3 meses y 6 meses después de la tercera inyección. Durante el seguimiento, los pacientes podrían retirarse en cualquier momento. Los pacientes sin una tasa de cumplimiento superior al doble debían retirarse después de la aprobación del investigador principal.

Las medidas de resultado

Sialometria

Se pidió a los pacientes que asistieran entre las 8:00 y las 10:00 a. m. en la misma habitación con temperatura y humedad constantes para minimizar la variación diurna. Se abstuvo de comer/masticar, beber y cepillarse los dientes 90 minutos antes de cada cita. Después de descansar durante 10 minutos, se recogió saliva entera no estimulada (UWS) mediante un recipiente de plástico estéril y pesado previamente cada 30 s durante un período de 5 minutos. La saliva total estimulada (SWS) se recolectó pidiendo a los pacientes que masticaran un trozo de tubo de caucho de silicona esterilizado (4 * 8 mm) y escupieran toda la saliva en otro recipiente con la misma frecuencia y período de UWS. UWS y SWS se determinaron mediante el resultado de volver a pesar cada contenedor después de la recolección restando el peso del contenedor vacío.¹⁴.

Schirmer pruebo

Introdujimos el test de Schirmer I para medir el flujo lagrimal (FL) sin anestesia tópica previa para medir la secreción lagrimal. Se colocó una tira de papel de filtro especial Whatman de 20 mm * 5 mm (Cytiva®, Shanghai, China) en el tercio lateral del párpado inferior bilateral. La longitud de la porción humedecida de la tira se midió al quinto minuto.¹⁵.

ESSDAI y ESSPRI¹⁶

La actividad de la enfermedad se evaluó utilizando el índice de actividad de la enfermedad del síndrome de Sjögren de la Liga Europea contra el Reumatismo (ESSDAI). Estos cuestionarios fueron completados por los pacientes al inicio y en los seguimientos. El ESSDAI incluye 12 dominios, incluidos cutáneo, respiratorio, renal, articular, muscular, sistema nervioso periférico, sistema nervioso central, hematológico, glandular, constitucional, linfadenopático e inmunológico, con una puntuación total que oscila entre 0 y 3 puntos.

El SS Patient Reported Index (ESSPRI) de la Alianza Europea de Asociaciones de Reumatología es un cuestionario administrado por el paciente para evaluar los síntomas de la enfermedad en una escala de 10 puntos de dolor, fatiga y sequedad. Se pidió a los pacientes que mostraran la escala máxima que habían experimentado durante los últimos 3 días en la regla VAS. Las puntuaciones en la regla eran de al menos 10 cm con 10 escalas visuales analógicas, que indicaban sequedad, dolor y fatiga.

Índices inmunológicos

Se extrajeron muestras de sangre venosa de los pacientes entre las 6:00 y las 8:00 am antes de la administración de la inyección de ADSC y en cada seguimiento. Las muestras de suero se transportaron a -20 °C y se mantuvieron a -80 °C en un congelador hasta su análisis. Los índices inmunológicos, incluidos IgA, IgG, IgM, complemento 3 (C3), complemento 4 (C4) y velocidad de sedimentación globular (ESR), se analizaron utilizando un citómetro de flujo (Beckman Coulter®, Fullerton, CA).

Evaluaciones de seguridad

Para evaluar la seguridad y los efectos tóxicos, se registraron valores de laboratorio clínico, signos vitales, examen físico y electrocardiografía de 12 derivaciones al inicio y en los seguimientos. Un evento adverso (EA) emergente del tratamiento se definió como cualquier síntoma adverso que ocurrió desde la primera dosis de medicación hasta el final del estudio. Estos estaban posiblemente, probablemente o definitivamente relacionados con la medicación del estudio a juicio del investigador.

análisis estadístico

En este estudio, los datos se analizaron estadísticamente utilizando el software SPSS v20.0 (IBM Corp, Armonk, NY, EE. UU.) y se visualizaron utilizando GraphPad Prism 7 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, EE. UU.). La información demográfica y del estado de salud al inicio del estudio se resumió utilizando medias (desviación estándar, DE) para variables continuas y frecuencias (porcentajes) para variables categóricas. Primero se examinó la normalidad de los datos mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov y los datos que alcanzaron la normalidad se analizaron utilizando métodos paramétricos, mientras que los demás utilizaron métodos no paramétricos. Las diferencias en las variables continuas entre los grupos se probaron mediante la prueba t o la prueba U de MannWhitney, mientras que las diferencias en las variables categóricas se probaron mediante las pruebas de Chi-cuadrado o las pruebas exactas de Fisher. En nuestro ensayo, se aplicó la prueba t no apareada para probar los índices inmunológicos UWS, SWS, LF, ESSDAI y ESSPRI para determinar la diferencia significativa entre el inicio y el seguimiento. Se utilizó la prueba t pareada para analizar diferencias significativas entre grupos en cada punto de datos. Todos los valores de p informados provinieron de pruebas bilaterales y se compararon con un nivel de significancia de 0.05 (α = 0.05).

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• Fuente: https://www.nature.com/articles/s41598-023-40802-5