El tracto reproductivo femenino (hembra-RT) debe descifrar el repertorio de señales moleculares recibidas del macho durante la cópula para activar y coordinar la funcionalidad del tracto necesaria para una alta fertilidad. En Drosophila, esta modulación está parcialmente impulsada por las células secretoras espermatecales (SSC). El SSC es una capa de células glandulares secretoras cuboidales que rodean la cápsula de la espermateca donde se almacena el esperma. No está claro, sin embargo, cómo el SSC regula la actividad del sistema. *

En el artículo "La comunicación macho-hembra mejora la liberación de vesículas extracelulares que conducen a una alta fertilidad en DrosophilaJavier Arturo Sanchez-Lopez, Shai Twena, Ido Apel, Shani Chen Kornhaeuser, Michael Chasnitsky, Andras G. Miklosi, Perla J. Vega-Dominguez, Alex Shephard, Amir Hefetz y Yael Heifetz muestran que el apareamiento activa la maquinaria secretora del SSC .*

El SSC libera una población heterogénea de vesículas extracelulares (EV) que está involucrada en iniciar y gestionar el aumento de la puesta de óvulos y, posiblemente, el almacenamiento de esperma. Además, el esperma y las proteínas de las glándulas accesorias masculinas son esenciales para dicha actividad SSC mediada por el apareamiento. Por lo tanto, el apareamiento regula las vías secretoras/endocíticas requeridas para el tráfico de vesículas a los sitios objetivo SSC-hembra-RT, que modulan y coordinan la actividad del tracto reproductivo para lograr una alta fertilidad. *

Los autores utilizaron microscopía de fuerza atómica para escanear las vesículas extracelulares (EV).

Las muestras se escanearon en líquido utilizando AFM cantilever beam 3 (CB3) de los NANOSENSORS sonda uniq qp-BioAC-CI Sondas AFM. Las puntas AFM qp-BioAC-CI se han redondeado a un radio de punta AFM nominal de 30 nm y están diseñadas para aplicaciones de imágenes celulares y mediciones en muestras blandas y de ciencias de la vida. Las sondas uniqprobe qp-BioAC-CI AFM cuentan con tres voladizos AFM rectangulares diferentes en un lado del chip de soporte y los voladizos unen frecuencias de resonancia bastante altas con constantes de fuerza bajas.

El revestimiento de oro reflectante depositado en el lado del detector de los voladizos del AFM cubre solo el extremo libre por encima de donde se encuentra la punta del AFM. Las principales ventajas del revestimiento uniqprobe son una flexión en voladizo AFM considerablemente menor y una deriva térmica reducida, especialmente para mediciones en entornos líquidos.

Las muestras también se escanearon en modo QI, en el que se mide una curva de fuerza en cada píxel.*

A partir de estas curvas de fuerza, los autores calcularon la fuerza de adhesión y el módulo de Young. *

Los perfiles de adhesión y módulo de Young se crearon midiendo el valor medio de la partícula en tres áreas diferentes de 5 × 5 µm. El diámetro (nm) se obtuvo creando una sección transversal de cada EV y midiendo la base del perfil. *

La participación de los EV en las rutas de comunicación SSC-femenino-RT ha agregado otra capa de complejidad al proceso que conduce al cambio hacia un femenino-RT funcional y a una alta fertilidad. El mecanismo preciso por el cual las señales derivadas de hombres, incluidos los vehículos eléctricos, afectan el tráfico derivado de SSC aún no se ha resuelto. Descifrar la comunicación macho-hembra a través de EV en Drosophila y otros organismos contribuirá en gran medida a nuestra comprensión de las diferentes combinaciones de modalidades de entrada y redes de salida que conducen a una alta fertilidad. *

 CD63-GFP) se cultivaron ex vivo para caracterizar las partículas que se liberaron en los medios gastados: una distribución de tamaño de partículas positivas para CD63-GFP (n = 25 espermatecas de 15 moscas) utilizando el seguimiento de partículas individuales del Nanoimager. b Caracterización de partículas CD63-GFP por ExoView (100 espermatecas de 50-60 moscas) usando anti-GFP o anti-CD63. c Imagen dSTORM representativa de los vehículos eléctricos encontrados en los medios gastados de SSC que expresan CD63-GFP (n = 25 espermatecas de 15 moscas), teñidas con el anticuerpo primario anti-CD555 conjugado con AlexaFluor63. La imagen muestra EV positivos para CD63-GFP y moléculas únicas de CD63 AlexaFluor555 en la superficie del EV. Barras de escala = 1 µm e inserciones = 20 nm. d – e La morfología de los vehículos eléctricos en los medios gastados se observó mediante tinción negativa e en STEM; barra de escala = 200 nm; y por d Cryo-TEM; Barra de escala = 100 nm (ver también Fig. 5a-c complementaria). f–i Los medios gastados de espermatecas cultivadas ex vivo se analizaron para determinar la presencia de EV: f Escaneos AFM representativos de SSC-EV aislados mediante clasificación acústica (n = 100 espermatecas de 70 moscas), que muestran de izquierda a derecha: altura (nm ), imágenes de adhesión (pN) y módulo de Young (MPa). Barras de escala = 100 nm (consulte la figura complementaria 5d-g). g–i Seguimiento de partículas individuales en el nanoimager. g Distribución del tamaño de partícula positivo para CellMaskTM y perfiles de concentración de EV en los medios gastados de espermatecas incubadas en medios solos (sin ecdy) o con ecdisona (Ecdy) -estimulación con ecdisona y métodos, sección de cultivo de espermateca ex vivo); los medios con solo tinción CellMaskTM sirvieron como control para la formación de agregados de tinción. h Concentración de partículas e i diámetro medio de partículas (nm) de g; Los diagramas de caja son las medidas de partículas de cuatro marcos de medios gastados de 5 espermatecas; las cajas representan valores máximos, medianos y mínimos con valores atípicos; ANOVA unidireccional, con prueba post-hoc de comparación múltiple de Wilcoxon no paramétrica; *pags 

*Javier Arturo Sanchez-Lopez, Shai Twena, Ido Apel, Shani Chen Kornhaeuser, Michael Chasnitsky, Andras G. Miklosi, Perla J. Vega-Dominguez, Alex Shephard, Amir Hefetz y Yael Heifetz
La comunicación macho-hembra mejora la liberación de vesículas extracelulares que conducen a una alta fertilidad en Drosophila
Nature Communications Biology volumen 5, Número de artículo: 815 (2022)
DOI: https://doi.org/10.1038/s42003-022-03770-6

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Acceso abierto: el artículo “La comunicación macho-hembra mejora la liberación de vesículas extracelulares que conducen a una alta fertilidad en Drosophila” por Javier Arturo Sanchez-Lopez, Shai Twena, Ido Apel, Shani Chen Kornhaeuser, Michael Chasnitsky, Andras G. Miklosi, Perla J. Vega-Dominguez, Alex Shephard, Amir Hefetz y Yael Heifetz tiene licencia Creative Commons Attribution 4.0 International Licencia, que permite el uso, el uso compartido, la adaptación, la distribución y la reproducción en cualquier medio o formato, siempre que se otorgue el crédito adecuado al autor o autores originales y a la fuente, proporcione un enlace a la licencia Creative Commons e indique si hay cambios. fueron hechos. Las imágenes u otro material de terceros en este artículo están incluidos en la licencia Creative Commons del artículo, a menos que se indique lo contrario en una línea de crédito al material. Si el material no está incluido en la licencia Creative Commons del artículo y su uso previsto no está permitido por la regulación legal o excede el uso permitido, deberá obtener el permiso directamente del titular de los derechos de autor. Para ver una copia de esta licencia, visite https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.